改善表面修飾方法於光纖式表面電漿共振生物感測器 - 國家圖書館
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表面電漿共振(surface plasmon resonance, SPR) 生物感測器因為具有不需標記、高靈敏度、專一性與即時檢測等優點,因此被大量使用在生物檢測上。
而光纖式表面電漿共振 ...
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表面電漿共振(surfaceplasmonresonance,SPR)生物感測器因為具有不需標記、高靈敏度、專一性與即時檢測等優點,因此被大量使用在生物檢測上。
而光纖式表面電漿共振生物感測器則因為其微小化的外型、材料價格低廉與微小的感測區使得可應用於小體積樣本的檢測,其應用範圍越來越廣泛。
本研究使用光纖式表面電漿共振感測器來進行生物小分子檢測之研究,使用表面電漿共振的檢測系統,需在感測表面上做良好的表面修飾,以提升檢測靈敏度與變異度。
本研究以mercapto-undecanoicacid(MUA)與不同碳鏈長度物質β-mercaptoethanol(2-MEOH)與6-mercapto-1-hexanol(6-MHOH)依不同比例混合作為自我聚集單層(self-assembledmonolayer,SAM)沉積在光纖式SPR晶片的感測表面,並固定biotin-albuminbovineserum(biotin-BSA),作為一個小分子的檢測平台。
結果顯示,在矽晶片的試驗中,6-MHOH為SAM層或是使用混合SAM層皆可讓biotin-BSA的固定量較單一的MUASAM層增加,但在本系統的光纖SPR感測時,過多的biotin-BSA固定量可能造成SPR訊號的不穩定,相較之下,MUA的biotin-BSA固定量不是最多,但在光纖感測系統的穩定度卻是最大。
而在光纖的訊號放大試驗上,選擇一般研究中常用的酵素沉澱法和奈米金法作為訊號放大的試驗方法,結果顯示,以3,3’-diaminobenzidinetetrahydrochloride(DAB)作為基質的酵素沉澱放大方法較適用於本系統中。
因此MUA為SAM層及DAB沉澱訊號放大此兩條件為本光纖式SPR系統之最適條件。
Surfaceplasmonresonance(SPR)biosensorhasseveraladvantagessuchaslable-free,highsensitivity,specificityandreal-timedetection,soithasbeenusedforalargenumberofbiomoleculardetection.Thefiber-opticSPRbiosensorislowcostandhassmallsizeduetoitssmallsensingarea,itmakesthesensoridealforstudyingsmallvolumesofsamples.Theapplicationsaremoreandmorethanbefore.Inthisstudy,weusedthefiber-opticSPRsensortodeterminethesmallbiomolecules.UsingSPRdetectsystemneedstomakeagoodmodificationlayeronthesensingsurfacetoimprovethedetectingsensitivityandstability.Mercapto-undecanoicacid(MUA)mixedmoleculeswithdifferentlengthofcarbonchains,β-mercaptoethanol(2-MEOH)and6-mercapto-1-hexanol(6-MHOH),indifferentratiotodepositasself-assembledmonolayer(SAM)onthesensingsurface,andthenbiotin-albuminbovineserum(biotin-BSA)wasimmobilizedonSAMsurfaceoffiber-opticSPRasadetectionplatformforsmallmolecularanalytes.TheresultsshowthatSAMlayersbysingle6-MHOHorMUAmixedwith6-MHOHcouldimmobilizemorebiotin-BSAthanonebysingleMUAinsiliconwafersystem.Infiber-opticSPRsensingsystem,however,excessbiotin-BSAcouldcauseunstableintheSPRsignal.Inthecontrast,theimmobilizedbiotin-BSAwaslessforMUASAMlayer,butthestabilityinfiberSPRsensingsystemisthebest.InthetestforSPRsignalamplification,weselectenzymeprecipitationmethodandnanogoldmethodthatcommonusedinotherstudies.Andthen,theenzymeprecipitationmethodthatuse3,3’-diaminobenzidinetetrahydrochloride(DAB)assubstrateisbetterinthisfiber-opticSPRsystem.Therefore,usingMUAastheSAMlayerandamplifyingthesignalbyDABprecipitationarethebetterconditionstothefiber-opticSPRsystem.
中文摘要i英文摘要iii目錄v圖目錄viii表目錄xi第一章11.1生物感測器11.2表面電漿共振生物感測器介紹21.3光纖生物感測器61.4表面修飾131.5自我聚集單層131.6SPR訊號放大方法171.7研究動機與研究方法19第二章202.1實驗藥品202.2實驗器材212.3常用實驗藥劑與製備212.4實驗方法222.4.1biotin-BSA的製備242.4.2ELISA試驗242.4.3矽晶片試驗282.4.4光纖式SPR試驗32第三章383.1ELISA測試383.1.1ELISA檢測biotin-BSA最適固定量383.1.2競爭型ELISA法檢測biotin403.2矽晶片模擬測試403.2.1矽晶片之製備403.2.2矽晶片上biotin-BSA最適固定濃度測試423.2.3矽晶片上最佳SAM混合比例之測試443.2.4競爭型檢測biotin633.3光纖檢測653.3.1最適biotin-BSA固定濃度653.3.2訊號放大方法比較693.3.3光纖上不同比例SAM之SPR試驗763.3.4光纖式SPR檢測biotin78第四章824.1結論824.2未來展望83參考文獻84
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