qPCR 引物篇04 ------ BioTNT 引物筛选/primer 浓度的说明

1 O.D.260 值相当于33ug的oligo (国际统一标准),而每个碱基的平均分子量一般以330道尔顿进行计算。

客户可根据此数据和oligo的分子量得到摩尔数以计算溶液浓度。

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1O.D.260值系指在1ml体积1cm光程标准比色皿中，于260nm波长下的吸光度为1A260。

1O.D.260值相当于33ug的oligo(国际统一标准),而每个碱基的平均分子量一般以330道尔顿进行计算。

客户可根据此数据和oligo的分子量得到摩尔数以计算溶液浓度。

分子量计算公式如下: MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61 摩尔数的计算公式如下: nmol数 =  O.D.值×33(ug)÷1000MW  例:序列GTTGAGTGCTGGGCGTAG, OD260值为2,加1000ul消毒双蒸水溶解:  A=2     C=2    G=9    T=5        MW=(2×312)+(2×288)+(9×328)+(5×303)-61=5606         质量数=2×33ug=66ug       nmol数=66×1000÷5606=11.77nmol   ● Oligo呈干粉状黏附在试管壁上,打开时极易散失,所以开试管前应先离心,然后小心打开管盖.配液时请加入适量双蒸水溶解,充分振荡5-10分钟。

  ● 本核苷酸的5’和3’端均为羟基，若需加连磷酸基团，则需另外处理。

● 如对oligo进电泳分析，请用含7M尿素的聚丙烯酰胺凝胶电泳和1倍TBE缓冲液，不可使用琼酯糖电泳。

为了防止加样时的扩散和二级结构影响，上样前需用饱和尿素处理。

   ● -20℃以下长期保存。

    举例：引物合成单上标注10nmol；可以用100ul的水复溶，得到100umol/l浓度的储存液；   2、部分实验室使用的引物工作液浓度：   部分实验室习惯将引物工作浓度定为10umol/l;即在干粉引物复溶后的储存浓度100umol/l的基础上稀释10倍，得到10umol/l的工作浓度； 进行PCR反应时，通常在10ul体系中加入0.2ul上游引物，0.2ul的下游引物，得到200nmol/l的终浓度；或者在10ul体系中加入0.4ul上游引物，0.4ul的下游引物，得到400nmol/l的终浓度； 优点：引物工作浓度较高，可以作为储存浓度； 缺点：使用时加样体积过小，容易产生较大的加样系统误差；   3、BioTNT引物筛选提供的引物浓度：   BioTNT为了方便客户使用，提供的引物浓度为2umol/l，在终反应体系里是10*的浓度，即20ul体系中，上游引物加入2ul，下游引物加入2ul。

    其他内容请参考： http://www.BioTNT.com/news/news_162.htm   0 【打印】【返回】 产品咨询：[email protected]    BioTNT订阅号： ELISA、蛋白芯片、荧光定量PCR、PCRARRAY--BioTNT科研好助手 首页|关于BioTNT |联系我们|   沪公网安备31011202008058号 沪ICP备11033708号-1 BioTNT精准引物查询 BioTNTPreci®mRNAqPCR精准引物对 产品搜索说明：   1.搜索产品时先要选择搜索条件：品名搜索和货号搜索，搜索到产品列表时，可根据产品类别和品牌进行一次筛选； 2.由于某些产品的英文名较多，可更换关键词搜索； 3.当进行品名搜索时，切勿将品名和种类同时输入，否则就有可能搜索不到产品（例如：FASTFrameforChip Kits-4Slideframe生物芯片，将有可能搜索不到产品或者过多的产品）； 4.如果您需求的产品比较急时，可联系在线客服，即时为您提供更便捷的服务。